MycoLight 快速荧光革兰氏阳性细菌染色试剂盒

MycoLight 快速荧光革兰氏阳性细菌染色试剂盒提供了一种新颖的一步荧光测定法，用于确定活菌中的革兰氏菌。革兰氏染色是在临床和研究环境中对细菌进行分类的重要且广泛使用的方法。原始方法涉及很多步骤，例如热固定，两步染色方案，酒精提取和复染。这些步骤可能会导致不一致的染色。 该试剂盒使用了荧光标记的伴刀豆球蛋白A（ConA），这是一种凝集素，可选择性地与暴露于革兰氏阳性细菌表面的N-乙酰氨基葡糖结合。当革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌用荧光标记的ConA共轭物染色时，只有革兰氏阳性菌发出红色荧光。染色的细菌可以通过荧光监测。因为与其他现有染料相比，我们试剂盒中使用的荧光标记ConA共轭物显示出更高的亮度和光稳定性。

样品示例及操作

1.细菌样品的制备

1.1在适当的培养基中使细菌生长到对数后期。 准备细菌样品，浓度范围为10⁶到10⁸个细胞/ mL。 注意：在波长= 600 nm（OD600）处测量细菌培养物的光密度，以确定细胞数。 对于大肠杆菌培养，OD600 = 1.0等于8 x 10⁸细胞/ mL。

1.2通过以10,000 x g离心5分钟除去培养基，然后将沉淀重新悬浮在测定缓冲液（组分B）中。

2.染色方案

2.1向100 µL细菌样品中加入1 µL IF647-ConA储备溶液（100X）。

2.2充分混合，然后在室温下于黑暗中孵育5-15分钟。

2.3以10,000 x g离心5分钟，然后除去IF647-ConA染色溶液。

2.4重悬于100 µL分析缓冲液（组分B）中。

2.5使用荧光显微镜通过Cy5（Ex / Em = 650/669 nm）通道监控细菌的荧光。 注意：该协议仅提供指导，应根据不同的细菌菌株或其他特定需求进行优化。 如果观察到更高的背景，则可以在成像之前添加一个可选的检测缓冲液（组分B）洗涤步骤。