Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒是通过测量Caspase 9的活性而用于细胞凋亡检测的。Caspase 9是CED-3亚家族中的一员。活化的Caspase 9能切割下游caspases,例如caspase-3,-6和-7，起始caspase级联反应。在正常发育的中枢神经系统中，活化的Caspase 9是凋亡所必需的。Caspase 9已证明具有底物的选择性，其基序为Leu-Glu-His-Asp (LEHD)。本试剂盒利用(Ac-IETD)2-R110作为荧光指示器来检测caspas-9的活性。通过caspas-9的切割R110肽产生强绿色荧光，其发射光在520 nm和530 nm之间，激发光为480 nm和500 nm·之间。本试剂盒提供所有必需组分和最佳操作流程。该实验结果稳定，快速且适应高通量筛选。它不仅能够定量凋亡细胞中caspas-9的活性还能筛选caspas-9的抑制剂。

工作溶液配制

将50μLCaspase9底物（组分A）加入10mL测定缓冲液（组分B）中并充分混合。

操作步骤

1.通过将10μL/孔的10X测试化合物（96孔板）或5μL/孔的5X测试化合物（384孔板）加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。 对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在5％CO 2,37℃培养箱中孵育所需的一段时间以诱导细胞凋亡。

3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的半胱天冬酶9工作溶液。

4.将工作溶液板在室温下孵育至少1小时，避光。 注意：如果需要，在室温下加入测定加样溶液10分钟前，向选定的样品中加入1μL的1 mM Ac-LEHD-CHO caspase 9抑制剂，以确认对caspase 9样活性的抑制。

5.将细胞板（特别是非贴壁细胞）以800rpm离心2分钟（关闭制动器）。

6.监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度