Cell Meter 磷脂酰丝氨酸细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测

Cell Meter磷脂酰丝氨酸细胞凋亡检测试剂盒 *绿色荧光 适合于流式细胞检测*通过对磷脂酰丝氨酸(PS)进行检测，而实现细胞凋亡的检测。在凋亡细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）从胞内移位到胞外表面，因此PS出现在细胞的外表面可以作为细胞凋亡的起始或者中间阶段的通用指示器，也可以通过其形态学改变来测定。本试剂盒实验使用我们独有的Apopxin PS传感器，它是一种小分子PS传感器。一旦与膜上PS结合，发出绿色荧光。这种特殊的检测试剂盒最适合通过流式细胞仪的FITC通道（绿色荧光）检测细胞凋亡。目前商业化各种Annexin V凋亡检测试剂盒一般是将Annexin V进行传统的荧光团（FITC、Cy3）标记后作为荧光探针，通过检测细胞凋亡早期细胞膜外翻的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS），从而实现对细胞凋亡的检测。然而目前的检测受到荧光颜色、荧光强度和检测灵敏度等因素的限制。Cell Meter Phosphatidylserine Apoptosis Assay Kit则采用Apopxin PS Sensor代替了传统的Annexin V，前者能特异性的结合PS，并且其亲和力高于Annexin V，因此其稳定性和灵敏度更高，同时其偶联的荧光基团具有更好的光稳定性和强度，因此检测效果更灵敏快捷，尤其适合自动化和高通量分析。

操作步骤

1.用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用喜树碱处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。注意：对粘附细胞的Apopxin 结合流式细胞术分析不是常规检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。

2.离心细胞，得到1-5×10⁵个细胞/管。

3.将细胞重悬于200μL测定缓冲液（组分B）中。

4.将2μLApopxin Green（组分A）加入细胞中。

5.可选：将2μL100X碘化丙啶（组分C）加入细胞中，用于坏死细胞。

6.在室温下孵育20至60分钟，避光。

7.可选：在使用流式细胞仪分析细胞之前，添加200至300μL的测定缓冲液（组分B）以增加体积。

8.使用具有FL1通道的流式细胞仪（Ex / Em = 490 / 525nm）监测荧光强度。当碘化丙啶加入细胞时，使用FL2通道测量细胞活力。