7-AAD（7-氨基放线菌素D）

7-AAD 7-氨基放线菌素 D是用于检测细胞凋亡的试剂，7-氨基放线菌素D（7-AAD）是一种非渗透性染料，可用于鉴定死细胞。染料可以进入具有受损质膜或受损/无细胞代谢的细胞。 一旦进入细胞内，染料与细胞内DNA结合，产生高度荧光的结合物，这些结合物将细胞鉴定为无活力。 它广泛用于流式细胞术。 7-AAD可以被488nm激光氩激光线激发，荧光检测到650nm以上。 尽管7-AAD的发射强度低于碘化丙锭（PI），但由于光谱重叠小，因此与其他488 nm激发的荧光染料（如FITC和PE）相结合，更长的发射波长使其更适用于多重测定。

染色细胞分析方案

        通常7-AAD染色的染色在细胞染色的最后一步，并且它只能染死细胞。 以下程序适用于大多数细胞类型。 生长培养基，细胞密度，细胞类型和其他因素可能会影响染色。玻璃器皿上的残留洗涤剂也可能影响许多生物的染色，导致在没有细胞存在的溶液中出现明亮染色的物质。

1）制备1-10mM DMSO储备溶液。如果储存在-20°C，DMSO储备液可以保存6个月。

2）使用适合您样品的固定方案。

3）通过离心沉淀细胞，并将细胞重悬于缓冲盐溶液或培养基中，在pH 7.4下进行最佳染料染色。 培养物中的贴壁细胞可以在盖玻片上或细胞培养孔中原位染色。

4）使用0.5至5μM的浓度添加7-AAD染色，并将其孵育15至60分钟。

注意：在最初的实验中，最好在整个建议的范围内尝试几种染料浓度，以确定产生最佳染色的浓度。

5）在Ex / Em = 545 / 650nm处测量荧光强度（使用FL3进行流式细胞分析）

注意：7-AAD是一种潜在的致癌物质。 建议用户戴上手套，防护服和眼睛/面部保护装置，以免接触皮肤和眼睛。