鬼笔环肽-荧光素标记

这种绿色荧光鬼笔环肽缀合物（相当于FITC标记的鬼笔环肽）会选择性结合F-肌动蛋白。鬼笔环肽衍生物经常以纳摩尔浓度使用，常在甲醛固定和透化的组织切片、细胞培养或无细胞实验中用于标记、鉴定和定量F-肌动蛋白的便捷探针。

操作步骤

1.制备1000 X鬼笔环肽DMSO储备液：将30μLDMSO加入小瓶中。

2.制备1X鬼笔环肽结合物工作溶液：加入1μL1000X鬼笔环肽结合物DMSO溶液至1mL含1％BSA的PBS中。

注意1：鬼笔环肽结合物未使用的1000X DMSO储备溶液应等分并储存在-20℃，避光。

注意2：不同的细胞类型可能染色不同。鬼笔环肽结合物工作溶液的浓度的制备需要根据实际而定。

3.染色细胞：

3.1执行甲醛固定，在室温下将含3.0-4.0％甲醛的细胞在PBS中孵育10-30分钟。

注意：避免使用任何含甲醇的固定剂，因为甲醇会在固定过程中破坏肌动蛋白。 优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。

3.2用PBS冲洗固定细胞2-3次。

3.3可选：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定细胞（步骤2.2）3至5分钟，以增加渗透性。 用PBS冲洗细胞2-3次。

3.4将100μL/孔（96孔板）鬼笔环肽缀合物工作溶液（来自步骤1）加入固定的细胞（来自步骤2.2或2.3）中，并在室温下染色细胞20至90分钟。

3.5在加上盖玻片之前，用PBS轻轻冲洗细胞2至3次以除去过量的鬼笔环肽结合物，然后在显微镜下进行，密封和成像。