Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 红色荧光

该特定试剂盒设计用于在Ex / Em =575/597nm处以大斯托克斯位移的红色荧光标记活细胞的溶酶体。该试剂盒使用专有的溶解性染料，可能通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中。该指示剂中的溶质，是一种疏水性化合物，很容易渗透到完整的活细胞，并被保留在溶酶体内一段时间。进入溶酶体后，其荧光显著增强。这一关键特征显著降低了其染色背景，使其可用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞活力，细胞凋亡和细胞毒性。该试剂盒提供所有必要组件。 它适用于悬浮细胞和贴壁细胞。

样品示例及使用方法

1.准备溶酶体染色溶液：

1.1  取出试剂盒中A、B组分，室温避光静置5-10min。

1.2  移取20μLLysoBrite Red（组分A），用10mL活细胞染色缓冲液（组分B）进行稀释，制备染料工作液。

注意：1) 20μL的500XLysoBrite Red （组分A）足够完成一个96孔板，根据要求分装并储存未使用的500XLysoBrite Red（组分A）,避免反复冻融。

        2)荧光溶酶体指示剂的最佳浓度根据实际应用而改变，可以根据探针的渗透性对细胞类型、细胞或组织的染色条件进行调整。

2.细胞染色：

2.1对于贴壁细胞：

在96黑色/透明微孔板（100μL/孔/ 96孔板）或装有适当培养基内的培养皿的盖玻片上培养细胞，当细胞达到所需的汇合时，在96孔板或培养皿内加入等量的LysoBrite Red工作液，在37℃、5％CO₂条件下培养箱中孵育30分钟，用预温(37°C) Hanks和20 mM Hepes缓冲液(HBSS)或自配的缓冲液清洗细胞两次，用HBSS或生长培养基填充细胞孔，再使用配有TRITC过滤器组的荧光显微镜观察细胞，使之带红色荧光(Ex/Em = 575/600 nm)。

注意：1）如果细胞看起来没有充分染色，建议适当增加染料浓度或孵育时间。

2.2对于悬浮细胞：

向细胞中加入等量的LysoBrite Red工作液。在37℃、5％CO₂条件下培养箱中孵育30分钟，用预温(37°C) Hanks和20 mM Hepes缓冲液(HBSS)或自配的缓冲液清洗细胞两次，用HBSS或生长培养基填充细胞孔，再使用配有TRITC过滤器组的荧光显微镜观察细胞，使之带红色荧光(Ex/Em = 575/600 nm)。

注意:  1）如果细胞看起来没有充分染色，建议适当增加染料浓度或孵育时间。

         2）悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为贴壁细胞染色。