ROS Brite 活性氧荧光探针APF

活性氧（ROS）是含氧的化学反应性分子（如超氧化物，羟基，单线态氧和过氧化物）。由于存在不成对的价电子，ROS具有高反应性。 ROS形成氧的正常代谢的天然副产物，并且在细胞信号传导和体内平衡中具有重要作用。然而，在环境压力（例如，UV或热暴露）期间，ROS水平可显着增加。这可能导致细胞结构的显着损害。累积地，这被称为氧化应激。 ROS也由外源性源如电离辐射产生。在氧化应激条件下，ROS产生显着增加，导致随后膜脂，蛋白质和核酸的改变。这些生物分子的氧化损伤与衰老以及各种病理事件有关，包括动脉粥样硬化，致癌作用，缺血性再灌注损伤和神经退行性疾病。细胞渗透性ROS Brite APF和HPF试剂是非荧光的并且在与羟基自由基或过氧亚硝酸根阴离子反应时产生亮绿色荧光（激发/发射= 490 / 515nm），APF也将与次氯酸根阴离子（OCl-）反应。此外，APF和HPF在过氧化物酶存在下也与过氧化氢反应。可以使用荧光成像，高内容成像，微孔板荧光测定法或流式细胞术测量所得荧光。 APF和HPF显示出对光诱导氧化的相对高的抗性。 APF和HPF在与羟基或过氧亚硝酸根阴离子反应之前是非荧光的。

ROS Brite 染料的分析方案

该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。在制备ROS Brite 工作溶液之前，根据需要处理细胞。

1）在DMSO中制备10至20mM ROS Brite APF（或HPF）储备溶液。通过将DMSO储备溶液稀释到含有20mM Hepes缓冲液（HHBS）的Hanks溶液中，制备1至10μM的工作溶液。

2）根据需要处理细胞（例如，用50-100nM血管紧张素II处理RASM细胞3-5小时）。

3）用ROS Brite APF（或HPF）（1-10μM，步骤＃1）在37℃孵育细胞20-60分钟。

4）用HHBS缓冲液替换染料加载溶液。

5）用适当的荧光仪器在Ex / Em = 490 / 525mm（截止= 515nM）下用底部读取模式分析细胞（例如，用于荧光显微镜的FITC滤光片，用于流式细胞仪的FL1滤光片）。

注意：BSA和酚红会影响荧光，应谨慎使用。 APF和HPF均可用于溶液测定或细胞内测量。