FDP(荧光素二磷酸酯四铵盐)

 FDP [荧光素二磷酸酯四铵盐]，该产品在与磷酸酶相互作用后，无色和非荧光FDP被水解成高荧光荧光素，其表现出优异的光谱特性，与配备有氩激光激发的大多数荧光仪器的最佳检测相匹配。或者，FDP也可用于检测发色模式中的磷酸酶，因为酶产物（荧光素）表现出很大的消光系数（接近100,000cm-1mol-1）。在一些文献中，FDP被认为是最敏感的荧光磷酸酶底物之一。FDP已广泛用于各种ELISA测定。此外，它还用于检测酪氨酸磷酸酶。FDP是热不稳定的，需要特别注意保存固体样品和储备溶液。

1.准备工作解决方案：

1.1在升值溶剂中制备2至10 mM的储备溶液。任何未使用的溶液需要等分并在<-20℃冷冻。

注意1：不要使用DMSO，ETOH或METH制备SunRed™磷酸盐的原液，因为它可以显著提高分析背景。

注意2：避免反复冻融循环，避免光照。

1.2制备2X磷酸盐工作溶液：在实验当天，将底物溶解在升值溶剂中或在室温下解冻等份的储备溶液（来自步骤1.1）。在100 mM Tris缓冲液或您选择的缓冲液（pH 8至9）（非磷酸盐缓冲液）中制备10至50μM的2X工作溶液。

2.在上清液中进行磷酸酶测定：

2.1将50μL2X磷酸盐工作溶液（来自步骤1.2）加入磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，使总磷酸酶测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL2X磷酸盐工作溶液。

2.2在所需温度下孵育反应30至120分钟，避光。

2.3用荧光板读数器检测适当滤光片组的荧光增加。

2.4空白孔中的荧光（仅用测定缓冲液）用作对照，并从具有磷酸酶反应的那些孔的值中减去。