Amplite 荧光法D-乳酸检测试剂盒

乳酸是手性的并且具有两种光学异构体：L-乳酸和D-乳酸。 在代谢和运动过程中，乳酸盐通过乳酸脱氢酶（LDH）不断从丙酮酸产生。 监测乳酸水平是评估组织需氧量和利用率之间平衡的好方法，在研究细胞和动物生理学时非常有用。 D-乳酸不被哺乳动物代谢，其从体内消除主要取决于肾脏排泄。 D-和L-乳酸存在于许多发酵乳制品中，例如酸奶和奶酪，以及腌制蔬菜，腌制肉类和鱼类。 D-和L-乳酸含量是食品的质量指标，如鸡蛋，牛奶，果汁和葡萄酒。 血液中异常高浓度的D-乳酸通常是胃肠道中细菌过度生长的反映。

Amplite 荧光法D-乳酸检测试剂盒用于检测L-乳酸盐或D-乳酸盐。 生物样品，如血清，血浆，尿液，以及细胞培养样品。 在酶偶联测定中，乳酸与NADH成比例相关，其通过荧光NADH传感器特异性监测。 可以通过荧光酶标仪在Ex / Em = 540nm / 590nm下读取信号。 使用这种Fluorimetric Amplite D-Lactate Assay Kit，我们能够在100μL反应体积中检测到少至1.4μM的D-乳酸。 它应用广泛，可以很容易地适用于需要测量D-乳酸的各种应用。

操作方法

1.准备NAD储备溶液（100X）：

向NAD小瓶（组分C）中加入100μLH2O，制成100X NAD储备溶液。

2.准备D-乳酸储备液：

将200μLH2 O或1×PBS缓冲液加入到D-乳酸盐标准品（组分D）的小瓶中以制备100mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：未使用的D-lacate标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备D-乳酸标准品（0至1 mM）的连续稀释液：

3.1将10μLD-乳酸储备溶液（来自步骤2）加入990L 1x PBS缓冲液中以产生1mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：稀释的D-乳酸标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的1mM D-乳酸标准溶液进行1：3连续稀释，得到300,100,30,10,3,1和0μM的D-乳酸标准品系列稀释液。

3.3如说明书中的表1和2中所述，将含有D-乳酸盐标准品和含D-乳酸盐的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

4.准备D-乳酸测定混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分A）中。

4.2将50μLNAD储备液（100X，来自步骤1）加入组分A（来自步骤4.1）的瓶中，并且要混合均匀。

注意：这种D-乳酸测定混合物足以用于一个96孔板。未使用的D-乳酸测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

5.运行D-乳酸测定：

5.1将50μLD-乳酸测定混合物（来自步骤4.2）添加到D-乳酸标准品，空白对照和测试样品（参见步骤3.3）的每个孔中，以使总D-乳酸测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLD-乳酸测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3用Ex / Em = 530-570 / 590-600nm的荧光板读数器监测荧光增加（最佳Ex / Em = 540 / 590nm，在570nm处截止）